維生素B5對(duì)出芽短梗霉產(chǎn)普魯蘭多糖的影響
普魯蘭多糖是一種由酵母樣真菌出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)在深層發(fā)酵中以無定形黏液的形式,需氧狀態(tài)下產(chǎn)生的微生物胞外多糖,它是一種線性葡聚糖,由α-1,4糖苷鍵連接的麥芽三糖重復(fù)單位,經(jīng)α-1,6糖苷鍵聚合而成的直鏈狀多糖[1]。普魯蘭多糖是可食用和可生物降解的,還具有高保濕性能,限制水分遷移等作用[2],通常用作低熱量食品添加劑、膠囊、黏合劑、增稠劑和延伸劑等。低分子質(zhì)量的多糖由于其在生物組織中的高擴(kuò)散性而比高分子質(zhì)量的多糖更具優(yōu)勢(shì)[3]。而高分子質(zhì)量的普魯蘭多糖因其具有較高黏度而有很高的價(jià)值,在食品、制藥和化妝品等行業(yè)的應(yīng)用較廣,因此可將其制成微丸、不透氧膜、藥物膠囊等[4-6]。目前對(duì)普魯蘭多糖的研究還集中在其生產(chǎn)方面,如菌株和發(fā)酵工藝的優(yōu)化,研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞形態(tài)、培養(yǎng)基組成、培養(yǎng)條件等因素均能影響普魯蘭多糖生產(chǎn)[7-9]。普魯蘭多糖的產(chǎn)量和分子質(zhì)量是決定聚合物收率和特性的重要參數(shù)[10]。而普魯蘭多糖硬膠囊主要是由平均分子質(zhì)量為1.0×105~2.0×105 Da的商業(yè)普魯蘭制造的[4],因此,在提高產(chǎn)量的同時(shí)進(jìn)行分子質(zhì)量的調(diào)控具有一定的意義。
維生素B5又稱遍多酸或泛酸,是一種水溶性維生素,它是能量代謝所必需的微量營養(yǎng)素,且是合成輔酶A和?;d體蛋白的關(guān)鍵前體,輔酶A對(duì)脂肪酸代謝和檸檬酸循環(huán)至關(guān)重要[11]。EDWARDS等[12]在酵母發(fā)酵過程中添加了維生素B5從而增加H2S的生成。SLYSHENKOV等[13]在研究人類淋巴母細(xì)胞增加的機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn),將泛酸用于人淋巴母細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)會(huì)大大增加谷胱甘肽的含量。
本研究通過在培養(yǎng)基中添加維生素B5,探討其對(duì)普魯蘭多糖的產(chǎn)量和分子質(zhì)量的影響。對(duì)發(fā)酵過程中關(guān)鍵酶活性進(jìn)行測(cè)定,并對(duì)發(fā)酵前期(24 h)和后期(84 h)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)鑒定出的差異蛋白進(jìn)行生物學(xué)分析,目的在于了解維生素B5對(duì)普魯蘭合成的影響,為出芽短梗霉合成普魯蘭的機(jī)理研究提供參考。
1 材料與方法
1.1 材料與儀器
1.1.1 菌株
出芽短梗霉(Aureobsidium pullulans)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,保藏號(hào):CGMCC NO.7055。
1.1.2 主要試劑
蔗糖、(NH4)2SO4、MgSO4、NaCl、K2HPO4、酵母浸粉、牛肉粉,所有試劑均為國產(chǎn)分析純。
α-淀粉酶活性測(cè)定試劑盒(G0510F)、普魯蘭酶活性測(cè)定試劑盒(G0578F)、磷酸葡萄糖變位酶試劑盒(G0563F)、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶試劑盒(G0535F),蘇州格瑞思生物科技有限公司;真菌葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒(JL49526),上海將來實(shí)業(yè)股份有限公司。
1.1.3 主要儀器設(shè)備
08-F25型5 L自動(dòng)發(fā)酵罐,鎮(zhèn)江格瑞生物工程有限公司;TDL-5-A型高速離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠;5977B-7890B氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀,德國安捷倫科技有限公司;LC-20A高效液相色譜系統(tǒng),日本島津公司。
1.1.4 培養(yǎng)基
種子培養(yǎng)基(g/L):蔗糖100,酵母浸粉3,(NH4)2SO4 1,K2HPO4 2,MgSO4·7H2O 0.4,NaCl 2.5,F(xiàn)eSO4·7H2O 0.05,以6.0 mol/L HCl及6.0 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值6.0,121 ℃滅菌20 min。
發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):蔗糖 150,牛肉粉 5,K2HPO4 7,MgSO4·7H2O 0.4,NaCl 3,F(xiàn)eSO4·7H2O 0.05,以6.0 mol/L HCl及6.0 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值6.0,121 ℃滅菌20 min。
其中,實(shí)驗(yàn)組是在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加0.2 g/L的維生素B5。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 種子培養(yǎng)
取4 ℃冰箱中保存待用的新鮮斜面于28 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中活化2 h,然后從中挑取1環(huán)孢子接入種子培養(yǎng)基中,28 ℃,180 r/min搖床恒溫培養(yǎng)20~22 h,制得種子液。
1.2.2 發(fā)酵培養(yǎng)
搖瓶發(fā)酵培養(yǎng):以6%體積分?jǐn)?shù)的接種量,將種子液接種至裝有100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中,在180 r/min搖床中培養(yǎng),發(fā)酵前24 h溫度維持在32 ℃,后64 h溫度調(diào)節(jié)為28 ℃。
分批發(fā)酵培養(yǎng):按照6%體積分?jǐn)?shù)的接種量,將種子液接入到5 L發(fā)酵罐的培養(yǎng)基中,發(fā)酵前24 h溫度維持在32 ℃,后72 h溫度調(diào)節(jié)為28 ℃,罐壓恒定在0.02 MPa,通風(fēng)比為1∶1.25(體積比),初始pH 6.0,轉(zhuǎn)速400 r/min,培養(yǎng)周期96 h。
1.2.3 指標(biāo)測(cè)定
細(xì)胞干重及普魯蘭產(chǎn)量的測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[14]。參照文獻(xiàn)[15]的方法測(cè)定普魯蘭分子質(zhì)量。磷酸葡萄糖變位酶(glucose phosphate mutase,PGM)、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(uridine diphosphate glucose pyrophosphorylase,UGP)、葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(glucosyltransferase,GTF)、α-淀粉酶和普魯蘭酶的活性用試劑盒測(cè)定。
1.2.4 出芽短梗霉蛋白質(zhì)組學(xué)
取適量84 h的發(fā)酵液于2.5 mL EP管中,10 000 r/min離心10 min,棄上清液留菌體。然后將菌體用PBS重懸,10 000 r/min下精準(zhǔn)快速離心10 min,此操作重復(fù)3次,最后將菌體用液氮速凍10 min,保存至-80 ℃下備用。取1管樣品液氮研磨,然后加入8 mol/L尿素(50∶1體積比加入蛋白酶抑制劑)超聲2 s,停2 s,共2 min。14 000 r/min離心20 min,取上清液,分裝,留取10 μL定量,其余凍入-80 ℃。
酶解脫鹽及質(zhì)譜色譜條件參照文獻(xiàn)[16]的方法。
1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為3組平行樣品計(jì)算結(jié)果的平均值。Origin 2019b軟件作圖。GO和KEGG的注釋用Uniprot的Yeast注釋數(shù)據(jù)完成。
2 結(jié)果與分析
2.1 維生素B5對(duì)普魯蘭合成的影響
在搖瓶發(fā)酵條件下,不同濃度維生素B5對(duì)出芽短梗霉細(xì)胞生長和普魯蘭合成的影響如圖1所示。

圖1 不同梯度濃度維生素B5對(duì)普魯蘭發(fā)酵的影響
Fig.1 Effect of different gradient concentrations of vitamin B5 on pullulan fermentation
維生素B5的添加提高了普魯蘭產(chǎn)量和菌體量,降低了黏度和普魯蘭的重均分子質(zhì)量。當(dāng)維生素B5添加量為0.2 g/L時(shí),普魯蘭產(chǎn)量達(dá)到最大值92.57 g/L,比對(duì)照提高了8.82%,單位菌體產(chǎn)量也從3.34 g/L提高到3.41 g/L;而普魯蘭多糖的重均分子質(zhì)量在此濃度下最低,比對(duì)照降低了50.20%。以上結(jié)果表明,培養(yǎng)基中維生素B5的存在有利于普魯蘭多糖產(chǎn)量的提高,同時(shí)能降低它的重均分子質(zhì)量。
2.2 發(fā)酵罐驗(yàn)證維生素B5對(duì)普魯蘭多糖的影響
在5 L發(fā)酵罐中對(duì)出芽短梗霉進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),檢測(cè)了0.2 g/L維生素B5和對(duì)照條件下的菌體量、分子質(zhì)量和普魯蘭多糖合成情況。通過圖2分析可知,0~12 h內(nèi),對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的菌體量一致,24 h以后,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的菌體量開始出現(xiàn)變化,維生素B5的添加刺激了出芽短梗霉的生長,同時(shí)普魯蘭的產(chǎn)量由對(duì)照組的87.3 g/L提高至實(shí)驗(yàn)組的102 g/L,產(chǎn)量增加了16.8%。單位菌體產(chǎn)量也從5.45 g/L提高到5.9 g/L,在維生素B5存在的情況下,普魯蘭最終重均分子質(zhì)量由對(duì)照組的2.14×102 kDa下降到實(shí)驗(yàn)組的1.11×102 kDa,降幅為48.2%。分子質(zhì)量在發(fā)酵的早期達(dá)到最大值,隨著發(fā)酵的進(jìn)行逐漸降低,與AN等[17]研究的結(jié)果一致。這可能是因?yàn)樵谂囵B(yǎng)和發(fā)酵過程中,培養(yǎng)基中分泌的普魯蘭酶和α-淀粉酶導(dǎo)致了普魯蘭多糖的分子質(zhì)量在生長后期顯著降低[18]。

a-菌體量;b-普魯蘭產(chǎn)量;c-重均分子質(zhì)量
圖2 添加維生素B5對(duì)普魯蘭多糖發(fā)酵的影響
Fig.2 Effect of adding vitamin B5 on pullulan fermentation
2.3 普魯蘭多糖生物合成和降解中關(guān)鍵酶的活性
由圖3可知,在出芽短梗霉發(fā)酵產(chǎn)普魯蘭過程中,與空白組相比,實(shí)驗(yàn)組的PGM、UGP和GTF都有所提高,關(guān)鍵酶活性的增強(qiáng)從而使得多糖合成有所加強(qiáng)。

a-磷酸葡萄糖變位酶活性;b-尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性;c-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活性;d-α-淀粉酶活性;e-普魯蘭酶活性
圖3 普魯蘭多糖生物合成和降解過程中關(guān)鍵酶活性
Fig.3 Key enzyme activities in the biosynthesis and degradation of pullulan
而對(duì)于實(shí)驗(yàn)組分子質(zhì)量大幅度的降低,實(shí)驗(yàn)測(cè)定了發(fā)酵過程中α-淀粉酶活性和普魯蘭酶活性的變化趨勢(shì),α-淀粉酶隨著發(fā)酵的進(jìn)行活性也在增大,實(shí)驗(yàn)組任意時(shí)間點(diǎn)的α-淀粉酶活性均大于空白組。發(fā)酵前中期并未檢測(cè)到普魯蘭酶活性,可能是由于活性太低或者發(fā)酵前中期沒有普魯蘭酶的合成,在發(fā)酵后期72 h和發(fā)酵末期96 h,實(shí)驗(yàn)組的普魯蘭酶活性均大于空白組。因此可以推斷,實(shí)驗(yàn)組中維生素B5的添加使得重均分子質(zhì)量的降低可能是由于胞內(nèi)α-淀粉酶和普魯蘭酶活性的增強(qiáng)。
2.4 蛋白質(zhì)組學(xué)分析
2.4.1 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的鑒定及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果
按照表達(dá)倍數(shù)變化1.5倍以上的標(biāo)準(zhǔn)篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì),結(jié)果如表1所示,出芽短梗霉發(fā)酵合成普魯蘭多糖的過程中,前期(24 h)和后期(84 h)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比分別鑒定出差異蛋白387和381種。
表1 差異蛋白質(zhì)定量結(jié)果統(tǒng)計(jì)
Table 1 Statistics of protein quantification results

2.4.2 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的鑒定及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果
采用層次聚類算法對(duì)比較組的差異表達(dá)蛋白質(zhì)分別進(jìn)行聚類分析,如圖4所示。紅色代表上調(diào)蛋白,藍(lán)色代表下調(diào)蛋白,顏色越深表示差異越加明顯。其中主要差異蛋白變化情況如表2所示。

1-對(duì)照組;2-實(shí)驗(yàn)組
圖4 全局分析聚類熱圖
Fig.4 Global analysis cluster heat map
表2 差異蛋白結(jié)果統(tǒng)計(jì)
Table 2 Differential proteins statistics

2.4.3 差異表達(dá)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化分類體系功能富集分析
差異表達(dá)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化分類體系,它從生物學(xué)的3個(gè)方面對(duì)蛋白質(zhì)功能進(jìn)行分類,即細(xì)胞組分、分子功能和生物過程。通過對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)(24和84 h)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組差異蛋白的GO功能富集分析,結(jié)果如圖5所示。
發(fā)酵前期(24 h)差異蛋白GO功能富集分析顯示,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異蛋白主要參與核糖體生物起源、甾醇生物合成的過程、RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄、RNA轉(zhuǎn)錄tRNA和RNA聚合酶的終止等生物過程。富集到的差異蛋白主要定位到出芽短梗霉細(xì)胞膜的組成部分、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、核質(zhì)和核糖體等位置。差異蛋白在分子功能上主要體現(xiàn)在Zn2+結(jié)合、蛋白酶活性、RNA聚合酶Ⅰ活性、大核糖體亞基rRNA及核酸結(jié)合。發(fā)酵后期(84 h)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異蛋白所參與的生物過程主要是麥角固醇的生物合成過程、核糖體生物起源、RNA聚合體的轉(zhuǎn)錄、核轉(zhuǎn)錄的mRNA分解代謝過程及組氨酸生物合成的過程。富集到的差異蛋白主要定位到出芽短梗霉細(xì)胞的膜的組成部分、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、核糖體等位置上。這與24 h差異蛋白在細(xì)胞組分上的定位一致。差異蛋白在分子功能上主要體現(xiàn)在Zn2+結(jié)合、DNA結(jié)合、RNA聚合酶I活性等。

a-24 h;b-84 h
圖5 24 h和84 h差異蛋白GO功能富集分析
Fig.5 24 h,84 h differential protein GO terms enrichment analysis
2.4.4 差異表達(dá)蛋白質(zhì)代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路富集分析
通過對(duì)鑒定出來的差異蛋白進(jìn)行KEGG功能注釋,將其按照所屬的不同代謝途徑進(jìn)行功能分類。并對(duì)不同途徑中富集到的蛋白數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì),按照蛋白統(tǒng)計(jì)數(shù)目排列出前20的代謝通路,統(tǒng)計(jì)注釋結(jié)果如圖6所示。

a-24 h;b-84 h
圖6 24 h和84 h差異蛋白KEGG通路富集度分析
Fig.6 24 h,84 h differential protein KEGG pathway enrichment analysis
發(fā)酵前期(24 h)差異蛋白參與的代謝通路主要有類固醇生物合成、甘油肌醇代謝、戊糖和葡萄糖醛酸酯的相互轉(zhuǎn)化、不飽和脂肪酸的生物合成、組氨酸代謝、β-丙氨酸代謝及磷酸肌醇代謝。發(fā)酵后期(84 h)差異蛋白主要涉及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、磷酸肌醇代謝、類固醇生物合成、不飽和脂肪酸的生物合成、果糖和甘露糖代謝、組氨酸代謝、精氨酸生物合成及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工等途徑。由此可見,實(shí)驗(yàn)組中維生素B5的存在,影響了發(fā)酵過程中碳代謝、氨基酸代謝及脂肪酸代謝,這些均可能與普魯蘭多糖產(chǎn)量和重均分子質(zhì)量的變化有關(guān)。
2.4.5 差異蛋白代謝途徑分析
有學(xué)者提出了一種通過蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝圖的基因重要性確定代謝途徑的活性和方向性的方法[19]。因此,根據(jù)篩選出的主要差異蛋白質(zhì),結(jié)合KEGG通路和關(guān)鍵酶活性的測(cè)定分析了差異蛋白對(duì)代謝途徑的影響,同時(shí)結(jié)合LIU等[20-21]的研究并繪制了差異蛋白對(duì)出芽短梗霉代謝途徑影響圖,如圖7所示。
己糖激酶是參與糖酵解、果糖和甘露糖代謝中的酶[22],同時(shí)也是普魯蘭多糖生物合成途徑中的關(guān)鍵酶之一。在糖酵解中,己糖激酶是參與α-D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成α-D-6-磷酸葡萄糖和β-D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成β-D-6-磷酸葡萄糖的酶[22],實(shí)驗(yàn)組中檢測(cè)到己糖激酶相關(guān)蛋白表達(dá)量的提高,促使更多的α-D-6-磷酸葡萄糖和β-D-6-磷酸葡萄糖合成,從而加強(qiáng)了普魯蘭的合成過程及三羧酸(tricarboxylic acid,TCA)循環(huán)的進(jìn)行。在果糖和甘露糖代謝中,己糖激酶可以促進(jìn)D-甘露糖轉(zhuǎn)化成D-6-磷酸甘露糖,而D-6-磷酸甘露糖又將生成β-D-6-磷酸葡萄糖進(jìn)入普魯蘭多糖合成的主途徑中,因此,己糖激酶表達(dá)量的提高有利于普魯蘭多糖的合成。

圖7 維生素B5引起的差異蛋白對(duì)出芽短梗霉代謝途徑的影響
Fig.7 Effect of differential protein caused by vitamin B5 on the metabolic pathway of A.pullulans
在戊糖和葡萄糖醛酸酯的相互轉(zhuǎn)化途徑中,木糖還原酶表達(dá)量的下降抑制了D-木糖轉(zhuǎn)化為木糖醇,因此更多的D-木糖向著丙酮酸轉(zhuǎn)換,丙酮酸最終進(jìn)入TCA循環(huán)為發(fā)酵提供大量能量。
天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶是連接氨基酸代謝和碳水化合物代謝的關(guān)鍵代謝酶,并且通過參與天冬氨酸/蘋果酸穿梭將產(chǎn)生的能量轉(zhuǎn)移到線粒體[23]。在丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代謝途徑中,丙氨酸-乙醛酸轉(zhuǎn)氨酶表達(dá)量的上調(diào)促使L-丙氨酸轉(zhuǎn)化成丙酮酸,而天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶和谷氨酸合酶表達(dá)量的下調(diào),抑制草酰乙酸與L-天冬氨酸之間的相互轉(zhuǎn)化及α-酮戊二酸合成谷氨酸。而TCA循環(huán)是許多合成代謝和分解代謝途徑整合的重要紐帶,它被認(rèn)為是能量代謝的核心過程[24]。丙酮酸、草酰乙酸和α-酮戊二酸含量的提高,加強(qiáng)了TCA循環(huán),從而為出芽短梗霉菌體的生長和普魯蘭多糖的合成提高更多的能量。
在甘氨酸-絲氨酸-蘇氨酸代謝途徑中,蘇氨酸可以轉(zhuǎn)化為甘氨酸,甘氨酸又可以轉(zhuǎn)化為絲氨酸,最后由絲氨酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸,蘇氨酸醛縮酶表達(dá)量的提高增強(qiáng)了蘇氨酸轉(zhuǎn)化為甘氨酸途徑,而L-絲氨酸裂解酶表達(dá)量的提高使更多的絲氨酸向著丙酮酸方向進(jìn)行。
在纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解中,纈氨酸進(jìn)入TCA循環(huán)是通過轉(zhuǎn)化為琥珀酰輔酶A,琥珀酰輔酶A會(huì)進(jìn)一步的合成琥珀酸,而琥珀酸是TCA循環(huán)中必不可少的物質(zhì),醛脫氫酶表達(dá)量的提高加強(qiáng)了纈氨酸的降解,促進(jìn)了琥珀酰輔酶A的生成,使TCA循環(huán)更加高效的進(jìn)行。
在磷酸肌醇代謝中,α-D-6-磷酸葡萄糖是合成肌醇的出發(fā)物質(zhì),同時(shí)也是普魯蘭多糖合成路徑中的關(guān)鍵物質(zhì),肌醇磷酸合成酶是α-D-6-磷酸葡萄糖合成肌醇過程中的酶,其表達(dá)量的下降減弱了磷酸肌醇代謝,同時(shí)也保證了α-D-6-磷酸葡萄糖維持在較高的水平參與到普魯蘭多糖的合成途徑中去。
檸檬酸也是TCA循環(huán)中必不可少的物質(zhì),由草酰乙酸合成檸檬酸的過程中,檸檬酸合酶表達(dá)量的提高及前面分析得到的乙酰輔酶A的增強(qiáng),可以增大檸檬酸的含量并加速TCA循環(huán)的進(jìn)行。
維生素B5使PGM、UGP、GTF、α-淀粉酶和普魯蘭酶活性的提高,有利于向普魯蘭多糖合成的方向進(jìn)行,最終使其產(chǎn)量提高。而在α-淀粉酶和普魯蘭酶的作用下,高分子質(zhì)量的普魯蘭多糖被分解,從而降低了普魯蘭多糖的分子質(zhì)量。
3 結(jié)論與討論
本研究考察了維生素B5在普魯蘭生物合成中的作用,采用非標(biāo)記定量技術(shù)對(duì)出芽短梗霉進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照相比,0.2 g/L維生素B5顯著提高了普魯蘭多糖的產(chǎn)量和菌體量,同時(shí)顯著降低了它的重均分子質(zhì)量。而添加維生素B5的實(shí)驗(yàn)組PGM、UGP、GTF、α-淀粉酶和普魯蘭酶活性都有所提高。發(fā)酵前期(24 h)共篩選出387個(gè)差異蛋白,包括196個(gè)上調(diào)蛋白和191個(gè)下調(diào)蛋白,發(fā)現(xiàn)后期(84 h)共篩選出381個(gè)差異蛋白,其中包括182個(gè)上調(diào)蛋白和199個(gè)下調(diào)蛋白。通過對(duì)這些差異表達(dá)基因進(jìn)行GO功能注釋和KEGG通路富集分析,發(fā)現(xiàn)維生素B5影響了參與發(fā)酵過程中碳代謝、氨基酸代謝及脂肪酸代謝等,最終在提高了普魯蘭產(chǎn)量的同時(shí)降低了普魯蘭的分子質(zhì)量。研究結(jié)果有助于理解維生素B5在普魯蘭生物合成中的作用機(jī)制,同時(shí)也為出芽短梗霉合成普魯蘭的機(jī)理研究提供了參考。
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