蛋氨酸誘導(dǎo)大鼠高同型半胱氨酸血癥模型的實驗研究

摘要：目的  探討采用蛋氨酸不同途徑誘導(dǎo)大鼠高同型半胱氨酸血癥模型的效果。方法  雄性Wister大鼠24只，隨機分為對照組、高蛋氨酸飲水組、高蛋氨酸飼料組，每組8只。高蛋氨酸飲水組與高蛋氨酸飼料組分別給予2%蛋氨酸飲水與2%蛋氨酸飼料喂養(yǎng)5周，觀察各組大鼠每日平均進食量、每日平均進水量和體重增加量的變化；采用Elisa方法分別測定各組大鼠血清與血漿中的同型半胱氨酸濃度。結(jié)果  蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組血清與血漿中Hcy濃度均高于對照組（P＜0.05），而蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。每日平均進食量為對照組與蛋氨酸飼料組均高于蛋氨酸飲水組（P＜0.05）；每日平均飲水量蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組均高于對照組（P＜0.05）。體重增加量為對照組高于蛋氨酸飼料組（P＜0.05）和蛋氨酸飲水組（P＜0.05）結(jié)論  采用高蛋氨酸飲水和高蛋氨酸飼料誘導(dǎo)大鼠高同型半胱氨酸血癥模型，可得到一致性結(jié)果，相比而言采用飲水中添加蛋氨酸的方法較為簡便和經(jīng)濟。

關(guān)鍵詞  蛋氨酸；高同型半胱氨酸血癥；模型；大鼠

Experimental Study of Build Homocysteine Model by Methionine in Rats  

Abstract: Objects To explore the effect of homocysteinaemia model. intake methionine In different ways in rats. Methods  24 male Wister rats , randomly divided into control group, high methionine water group, high methionine feed groups, each group of eight. High methionine water group and high methionine feed group were respectively 2% methionine water and 2% methionine feed 5 weeks, to observe the rat average daily food intake, average daily water inflow and the change of weight gain; determination of rat serum and plasma of homocysteine concentration by Elisa method. Results  Methionine water group and methionine feed group of serum and plasma Hcy concentration were higher than those in the control group (P < 0.05), methionine water group and methionine feed group difference was statistically significant (P > 0.05). Average daily food intake control group and methionine feed group is higher than methionine water group (P < 0.05); Average daily water quantity methionine water group and methionine feed group were higher than that in control group (P < 0.05). The change of weight gain control group are higher than the methionine feed group (P < 0.05) and methionine water group (P < 0.05)   Conclusion  Using high methionine water and high methionine feed rats induced homocysteine model, can get consistency results, compared with the method of adding methionine in drinking water is relatively simple and economic.

Keywords:  methionine, Homocysteine, Model, rats

高同型半胱氨酸血癥是近年醫(yī)學(xué)界熱門研究內(nèi)容之一，同型半胱氨酸(Homocysteine, Hcy )是蛋氨酸(Methionine,Met)代謝的中間產(chǎn)物，是腺苷蛋氨酸酶水解反應(yīng)所生成的一種含硫基的氨基酸。越來越多的研究資料顯示, 高同型半胱氨酸血癥是心腦血管疾病的獨立危險因素[1]，Hcy因此被稱為能引起血管損傷、動脈粥樣硬化和血栓栓塞性疾病的氨基酸[2]。目前通過蛋氨酸誘導(dǎo)的高同型半胱氨酸血癥動物模型主要有3種方式，即通過蛋氨酸飼料喂養(yǎng)；蛋氨酸溶液灌胃；或蛋氨酸溶于動物飲水中建模。為探索更為有效、經(jīng)濟、簡便易行的建模方法，我們進行了如下研究。

1  材料與方法

1.1  實驗材料

蛋氨酸(methionine, Met)購自上海國藥集團有限公司；同型半胱氨酸試劑盒購自BG公司；酶標儀為EX800型（產(chǎn)自美國Biotsx公司）。蛋氨酸飼料制作方法為正常大鼠飼料制備時添加2%蛋氨酸。

1.2 動物模型制備

選用雄性Wister大鼠24只，體重200-250g，購自青海省地方病防治研究所。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分為3組，對照組、高蛋氨酸飲水組、高蛋氨酸飼料組，每組8只。高蛋氨酸飲水組給予2%蛋氨酸溶液作為飲用水；高蛋氨酸飼料組每日給予2%蛋氨酸飼料喂養(yǎng)。各組均自由進食、飲水，每日測定進食進水量。

1.3 血清和血漿中Hcy的測定

喂養(yǎng)5周后，從大鼠腹主動脈采血，各取2ml分別置于含有促凝劑的試管和含有肝素鈉抗凝劑的試管中保存，均置于3000r/min 離心15分鐘，取血清與血漿，采用ELISA法測定同型半胱氨酸含量，酶標儀測定波長為450nm。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)均以均數(shù)標準差(X±S)的形式表示,使用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計方法為方差分析和配對t檢驗。

2結(jié)果

2.1各組大鼠每日平均進食量與每日平均進水量的變化

各組大鼠每日平均進食量的比較發(fā)現(xiàn)，對照組與蛋氨酸飼料組高于蛋氨酸飲水組（P＜0.05）；而對各組大鼠每日平均飲水量的比較，蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組均高于對照組（P＜0.05），同時，蛋氨酸飼料組高于蛋氨酸飲水組（P＜0.05）。結(jié)果詳見圖1、圖2及表1。

2.2各組大鼠體重增加量的變化

對照組均高于蛋氨酸飼料組（P＜0.05）和蛋氨酸飲水組（P＜0.05），比較結(jié)果，見表1.

表1  各組大鼠平均每日進食量、平均每日進水量與體重增加量的變化(X±S)

注：★表示與對照組比較P＜0.05；◆表示與蛋氨酸飲水組比較P＜0.05。

2.3各組大鼠血清與血漿Hcy濃度變化

結(jié)果顯示，蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組血清與血漿中Hcy濃度均高于對照組（P＜0.05），而蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見表2。

表2  各組大鼠血清與血漿Hcy變化(X±S)

注：★表示與對照組比較P＜0.05；

3 討論

有些研究認為蛋氨酸含量超過3%[3，4]時會出現(xiàn)毒性，故本研究使用2%蛋氨酸飼料，造模5周后，血清Hcy濃度達到19.80±7.24umol/L（大于15 umol/L為高Hcy血癥[5]）；采用蛋氨酸飲水5周后血清Hcy濃度為22.08±5.73 umol/L，兩組無統(tǒng)計學(xué)差異，說明兩種方法均可得到一致性結(jié)果。

研究發(fā)現(xiàn),蛋氨酸飲水組和蛋氨酸飼料組大鼠體重增加量均低于對照組，可見補充蛋氨酸后影響了體重增長，有研究認為是由于蛋氨酸的毒性作用造成的[6]，但從圖1、圖2可看出，蛋氨酸飲水組大鼠進食量始終處于較低水平，我們認為可能是由于蛋氨酸試劑本身具有的特殊性氣味影響了大鼠的進水與進食量，從而造成體重增長變緩。

蛋氨酸飼料組建模過程中需要采用含有2%的特殊飼料，該飼料不易購得，自行制備較為不便，另外該飼料制作過程中需經(jīng)過較長時間高壓及烘制，可能會使蛋氨酸有效成分受到損失，相比較而言采用飲水中添加蛋氨酸的方法較為簡便和經(jīng)濟。

有文獻報道高同型半胱氨酸血癥大鼠可采用蛋氨酸灌胃法建模[7,8]，實驗中我們發(fā)現(xiàn)，如果按照蛋氨酸劑量1g/kg.d計算，體重為200g的大鼠每日灌胃量為0.2g，但由于蛋氨酸溶解度僅為3.3g/100ml水，無法將0.2g蛋氨酸溶于2ml水中，灌胃時蛋氨酸絮狀沉淀會在注射器底部被壓縮成片狀，很難灌入胃中，故不建議采用蛋氨酸灌胃法建模。

促凝管血清中Hcy的測定結(jié)果顯著高于抗凝管血漿中Hcy含量，與有關(guān)報道[9]一致。這可能與離心前從血液凝固到血清分離需要進行一段放置時間，使血細胞釋放Hcy入血清有關(guān)。

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