河豚毒素軟膠囊的制備工藝及其藥效學研究-醫(yī)學論文

　　河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）是一種鈉離子通道阻斷劑，其毒性雖強，但具有良好的鎮(zhèn)痛作用，可以緩解多種鈍痛及銳痛，且不產(chǎn)生依賴性，還可用于晚期癌癥止痛[1]。軟膠囊是現(xiàn)代化新劑型，可提高藥物穩(wěn)定性，相對用藥劑量準確，吸收速度優(yōu)于傳統(tǒng)劑型，藥物的生物利用度較高[2]。因此，本實驗對TTX軟膠囊的處方及制備工藝進行單因素考察，并對其藥效進行了初步考察。

　　1 儀器與試藥

　　1.1 儀器

　　YLS-6A智能熱板儀（山東省醫(yī)學科學院設(shè)備站），DF-101K磁力攪拌器（南京科爾儀器設(shè)備有限公司）。

　　1.2 試藥

　　TTX（江蘇泰州市康特生物工程有限公司，批號：000426），司盤（司盤20、司盤60、司盤80，國藥集團化學試劑有限公司），紫蘇籽油（大連圣基生物制品有限公司），檸檬酸（國藥集團化學試劑有限公司），檸檬酸鈉（昆山金城試劑有限公司），尼泊金乙酯（上海凌峰化學試劑有限公司），維生素E（南京立業(yè)制藥有限公司），吲哚美辛（山西云鵬制藥有限公司，批號：H14020771）。

　　1.3 動物

　　雌性ICR小鼠，清潔級，體重18~22 g，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，動物質(zhì)量合格證號：SCXK（滬）2007-0005。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 制備工藝的研究

　　2.1.1 增溶劑的選擇及用量 選用3種增溶劑（司盤20、司盤60、司盤80），每種增溶劑配制5份，其體積按照軟膠囊內(nèi)容物體積的0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%配制，置于磁力攪拌器中在60℃條件下攪拌，向其中加入蒸餾水，直至攪拌1 h水滴仍無法消失為止，記錄此時加入水的體積。由于司盤60所制得的油溶液流動性較差，故只考察司盤20與司盤80的增溶效果。結(jié)果表明，司盤80的增溶效果較好，故選擇司盤80作為增溶劑，用量為內(nèi)容物體積的0.20%。見圖1。 

　　圖1 不同增溶劑對水的增溶曲線 

　　2.1.2 抗氧化劑、防腐劑的選擇及用量 配制軟膠囊內(nèi)容物，每個處方含有不同量的維生素E（VE）和尼泊金乙酯，平行兩份樣品，按照《中國藥典》2010版附錄ⅪⅩ C“原料藥穩(wěn)定性試驗指導原則”，將各樣品置于密封具塞試管，并置于恒溫箱，在60℃條件下放置10 d，于第0天、第5天和第10天取樣，測定過氧化值。結(jié)果表明，未加抗氧化劑和防腐劑的處方，過氧化值增幅明顯；當VE用量為1.0%、尼泊金乙酯用量為0.2%時，過氧化值較低，故最終確定VE用量為1%，尼泊金乙酯用量為0.2%。見表1。 

　　表1 維生素E、尼泊金乙酯的用量對軟膠囊內(nèi)容物過氧化值的影響

　　2.1.3 攪拌時間的選擇 配制3份TTX酸水溶液，方法為精密稱取1 mg TTX，用0.2 mL檸檬酸緩沖液（pH=5）溶解，得TTX酸水溶液。分別加入到3個裝有1 mL司盤80的燒杯中，在60℃條件下攪拌，經(jīng)過不同時間后加入一定體積的紫蘇籽油，即得TTX紫蘇籽油溶液，靜置過夜，觀察油溶液是否分層。結(jié)果顯示，當攪拌時間為90 min時，所得的TTX紫蘇籽油溶液澄清，未出現(xiàn)分層，故確定攪拌時間為90 min。

　　2.1.4 囊殼處方選擇 囊殼處方采用軟膠囊常用的明膠-甘油-純化水配方，明膠、甘油與水的用量比為1.0∶0.3∶1.0[3-6]。

　　2.2 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗

　　調(diào)節(jié)熱板儀溫度，使其恒定在（53±0.5）℃，每次取雌性小鼠1只，放入熱板儀，記錄自放入熱板儀至出現(xiàn)舔后足所需時間，作為該鼠的痛閾值，凡少于6 s或超過60 s出現(xiàn)舔后足者棄之不用。取預(yù)選合格的小鼠50只，隨機分為5組，每組10只：溶媒對照組、吲哚美辛組（20 mg/kg）、TTX軟膠囊高劑量組（32 μg/kg）、TTX軟膠囊中劑量組（16 μg/kg）和TTX軟膠囊低劑量組（8 μg/kg），測定每只小鼠灌胃2 h后的痛閾值，計算痛閾提高率。見表2。

　　3 討論

　　TTX易溶于稀酸水溶液，本實驗選用常用的檸檬酸緩沖液（檸檬酸、檸檬酸鈉）作為TTX的溶劑。當溶劑pH值小于3時，TTX容易降解為脫水TTX[7]，因此pH值定為4～6較為合適，本實驗選用pH值為5的檸檬酸緩沖液溶解TTX，結(jié)果顯示效果良好。

　　由小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗結(jié)果顯示，本方法制得的TTX軟膠囊具有良好的鎮(zhèn)痛效果，且隨著劑量的增加，痛閾提高率越大，鎮(zhèn)痛效果越好。