核桃楸皮甲醇提取物的急性毒理研究-醫(yī)學(xué)論文

　　核桃楸皮（Cortex Juglandis Mandshuricae）為胡桃科核桃屬植物核桃楸（Juglans mandshurica Maxim.）的樹(shù)皮[1]。原植物核桃楸又名山核桃、胡桃、胡桃楸、小核桃等，為胡桃科胡桃屬落葉喬木，主要分布于我國(guó)東北地區(qū)（小興安嶺及張廣才嶺），河北、北京、內(nèi)蒙古、山西等地有少量分布，俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)、朝鮮、日本也有分布[2]，其樹(shù)皮及未成熟果實(shí)或果皮可用藥，樹(shù)皮又名楸樹(shù)皮，味苦性寒，具有清熱解毒、止痢明目的功效，主治泄瀉、痢疾、白帶、目赤[3]?，F(xiàn)代研究表明，核桃楸具有抗氧化[4]、抗菌、消炎、抗癌等作用[5]。近幾年核桃楸皮化學(xué)成分的分離提取和抗癌作用機(jī)制研究成為熱點(diǎn)，經(jīng)過(guò)現(xiàn)代對(duì)胡桃楸化學(xué)成分分析證明胡桃楸含有萘醌、胡桃醌、黃銅苷、鞣花酸及沒(méi)食子酸等化學(xué)物質(zhì)[6]。現(xiàn)為觀察其甲醇提取液的毒性及安全性，進(jìn)行急性毒性的實(shí)驗(yàn)研究。直接用SPSS軟件計(jì)算LD50，具有簡(jiǎn)單、快速、直觀和方便的特點(diǎn)[7]。

　　1 儀器與試藥

　　核桃楸皮（核桃揪皮采自黑龍江省牡丹江市牡丹峰）；灌胃器、燒杯、量筒、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電子天平等。

　　昆明種小鼠（牡丹江醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體重18～22 g，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物置于室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周，室溫20～28℃，采用架式籠養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)飼料，飲水為自來(lái)水。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 中藥提取液的制備

　　核桃楸皮粉碎后，用索氏提取器乙醚回流至無(wú)色，再經(jīng)甲醇提取48 h至無(wú)色，蒸干甲醇、轉(zhuǎn)水溶解、過(guò)濾、濃縮，形成最大濃度的混懸液0.181 1 mg/ml（以不堵塞灌胃器為限度），放入冰箱保存?zhèn)溆谩?

　　2.2 預(yù)實(shí)驗(yàn)

　　實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食不禁水12 h。隨機(jī)將昆明種小鼠分為5組，每組4只。①0.10 mL/10 g藥液，每日1次。②0.15 mL/10 g藥液，每日1次。③0.20 mL/10 g藥液，每日1次。④0.15 mL/10 g藥液，每日2次，每次灌胃間隔8 h。⑤0.20 mL/10 g藥液，每日2次，每次灌胃間隔8 h。連續(xù)觀察7 d，每2天稱一次體重，記錄死亡情況。結(jié)果：①無(wú)死亡，體態(tài)正常；②無(wú)死亡；③死亡1只；④、⑤全部死亡。將存活小鼠處死，解剖觀察內(nèi)臟器官，心、肝、脾、胃、腎未見(jiàn)異常。

　　2.3 急性毒性實(shí)驗(yàn)

　　選用昆明種小鼠40只，雌、雄各半，體重18～22 g，分為4組，每組10只，實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食不禁水12 h。①0.1 mL/10 g藥液，每日1次。②0.1 mL/10 g藥液，每日2次，每次灌胃間隔8 h。③0.1 mL/10 g藥液，每日3次，每次灌胃間隔8 h。④0.1 mL/10 g蒸餾水，每日3次，每次灌胃間隔8 h。連續(xù)觀察7 d，每2天稱一次體重，記錄死亡情況。結(jié)果：①無(wú)死亡；②死亡5只；③全部死亡。將①、④存活小鼠摘眼取血，測(cè)血液指標(biāo)備用，處死，解剖觀察內(nèi)臟器官，心、肝、脾、胃、腎未見(jiàn)異常。

　　2.4 結(jié)果分析

　　2.4.1 軟件SPSS 13.0計(jì)算LD50 輸入表1數(shù)據(jù)的過(guò)程如下：運(yùn)行SPSS 13.0 for Windows，進(jìn)入SPSS數(shù)據(jù)編輯器后，首先激活變量表（VariableView）定義變量，在變量名（name）下輸入“劑量”、“動(dòng)物數(shù)”和“死亡數(shù)”，并將“劑量”的小數(shù)點(diǎn)位數(shù)（Decimal）設(shè)為“2”，“動(dòng)物數(shù)”和“死亡數(shù)”的小數(shù)點(diǎn)位數(shù)設(shè)為“0”。然后進(jìn)入數(shù)據(jù)表（Data View），根據(jù)表頭提示，依次輸入各組數(shù)據(jù)。在數(shù)據(jù)表主菜單中，選擇Analyze——Regression——Probit，調(diào)出Probit Analyze對(duì)話框，只需將“劑量”選入“Covariates”欄中，“死亡數(shù)”選入“Response frequency”欄中，“動(dòng)物總數(shù)”選入“Total observed”欄中，在“Transform”欄中，選擇“l(fā)og base 10”（以10為底的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換），其他保持默認(rèn)選項(xiàng)。然后單擊“OK”鈕即完成整個(gè)操作過(guò)程。測(cè)定結(jié)果LD50為2.622 mg/kg，其95%可信范圍為1.811 mg/kg ≤ LD50 ≤ 5.433 mg/kg。

　　2.4.2 血液分析 各組數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0 for Windows，LSD-t方差分析，結(jié)果顯示，①、④各項(xiàng)血液指標(biāo)數(shù)據(jù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。

　　3 討論

　　有文獻(xiàn)報(bào)道，胡桃醌小鼠灌胃給藥的LD50為2.5 mg/kg，腹腔注射的LD50為25 mg/kg，大鼠灌胃給藥的LD50為112 mg/kg[8]。胡桃醌溶于乙醚，經(jīng)過(guò)乙醚回流后的核桃楸皮甲醇提取液仍然有很大毒性，說(shuō)明還含有其他脂溶性毒性物質(zhì)。

　　核桃楸皮甲醇提取液富集了極性比較大的脂溶性成分，其LD50為臨床科學(xué)、安全用藥提供了一定依據(jù)。SPSS統(tǒng)計(jì)軟件具有數(shù)據(jù)整理、分析和統(tǒng)計(jì)和結(jié)果輸出等多種功能，將其用于LD50的計(jì)算，直接在視窗系統(tǒng)中輸入數(shù)據(jù)，不需查表和編程，步驟簡(jiǎn)單，不易出錯(cuò)。