外周血淋巴細(xì)胞篩選敏感抗腫瘤藥物臨床應(yīng)用的可行性研究

    有效治療腫瘤是醫(yī)學(xué)上一個(gè)重要的課題，通常醫(yī)學(xué)上對(duì)于治療腫瘤患者采用化療的方法，化療能對(duì)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散具有一定的抑制作用，但是多次化療后，對(duì)于腫瘤擴(kuò)散的抑制作用就比較小了。這是因?yàn)榛颊呱眢w內(nèi)的腫瘤細(xì)胞對(duì)于化療藥物產(chǎn)生了一種耐藥性。耐藥性是病變體對(duì)化療藥物產(chǎn)生的一種耐受性，會(huì)降低藥物的療效。醫(yī)學(xué)上會(huì)尋找一些和腫瘤細(xì)胞具有相似性的細(xì)胞進(jìn)行抗腫瘤藥物的篩選，外周血淋巴細(xì)胞是一種和腫瘤細(xì)胞具有很大相似性的細(xì)胞，因此醫(yī)學(xué)上會(huì)使用外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行敏感性試驗(yàn)。文章對(duì)外周血淋巴細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的敏感進(jìn)行研究，報(bào)告如下。

一、資料和方法

1.1臨床資料

    選取我醫(yī)院在2011年7月~2012年1月的40例確診的腫瘤細(xì)胞患者，其中男性患者有25例，女性患者有15例，所有患者中年齡最低為55歲，最高為78歲，平均年齡在69±9.7歲。在這40例患者中，有大腸癌11例，胃癌11例，食管癌9例，膀胱癌7例，肺癌2例。所有患者此前均未進(jìn)行過(guò)化療治療。

1.2準(zhǔn)備藥物

    此次實(shí)驗(yàn)需要準(zhǔn)備的抗腫瘤藥物有8種，分別為表阿霉素、卡鉑、順鉑、威猛、長(zhǎng)春新堿、環(huán)磷酰胺、蓋諾、氨甲喋呤[1]。對(duì)這些藥物進(jìn)行調(diào)配，其中表阿霉素800g/ml、卡鉑400g/ml、順鉑800g/ml、威猛80g/ml、長(zhǎng)春新堿10g/ml、環(huán)磷酰胺500g/ml、蓋諾60g/ml、氨甲喋呤400g/ml。

1.3準(zhǔn)備試劑和器材

    準(zhǔn)備好需要用到的試劑和器材，試劑有胰蛋白酶、青霉素、淋巴細(xì)胞分離液、MTT、鏈霉素、血清、二甲基亞砜。器材有酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、顯微鏡、CO2孵箱。

1.4研究方法

    先將外周血通過(guò)淋巴細(xì)胞分離液分離出外周血淋巴細(xì)胞，再將患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行分離，用生理鹽水對(duì)腫瘤組織進(jìn)行清洗好后放入胰蛋白酶進(jìn)行消化，制成單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為適合孔板的數(shù)目。這樣就制成了外周血淋巴細(xì)胞懸液和腫瘤細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液分成ABC三組，A組為淋巴細(xì)胞懸液、抗癌藥物、培養(yǎng)液調(diào)配液，分別為100L/孔、10L/孔、90L/孔；B組為淋巴細(xì)胞懸液和培養(yǎng)液的調(diào)配液，均為100L/孔；C組為單純的培養(yǎng)液200L/孔。這三組調(diào)配液存放的孔板要加入CO2孵箱，在37.5℃的環(huán)境下培養(yǎng)48小時(shí)，并使用顯微鏡觀察細(xì)胞培養(yǎng)的動(dòng)態(tài)。最好要用MTT進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)外周血淋巴細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性進(jìn)行計(jì)算。

1.5細(xì)胞抑制率的計(jì)算

    對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液去掉上清后，用二甲基亞砜停止反應(yīng)，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)OD值。

細(xì)胞抑制率=（1-加藥組平均OD值/對(duì)照組平均OD值）×100%[2]。

1.6評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

    如果細(xì)胞抑制率≥50%則為具有高敏感性，30%~50%則為敏感，＜30%則為不敏感，即具有抗藥性。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    將所有數(shù)據(jù)進(jìn)行收集，并采用SPSS13進(jìn)行處理。數(shù)據(jù)的相關(guān)性分析則采用直線相關(guān)分析研究。

二、結(jié)果

    經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)可知，在這8種抗腫瘤藥物中，表阿霉素、威猛、蓋諾和環(huán)磷酰胺這4種抗腫瘤藥物對(duì)患者的腫瘤細(xì)胞抑制率和對(duì)外周血淋巴細(xì)胞的抑制率具有正相關(guān)的關(guān)系，兩者的相關(guān)性明顯，細(xì)胞抑制率分別為0.563、0.685、0.324、0.528；氨甲喋呤、順鉑、長(zhǎng)春新堿和卡鉑這4種抗腫瘤藥物對(duì)患者的腫瘤細(xì)胞抑制率和對(duì)外周血淋巴細(xì)胞的抑制率關(guān)系不明顯，細(xì)胞抑制率分別為0.121、0.258、0.176、0.068。

三、討論

    從實(shí)驗(yàn)可知，外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行篩選敏感抗腫瘤藥物具有一定的可行性。

    在腫瘤和癌癥的治療中，通常會(huì)使用化療手段進(jìn)行治療，化療能對(duì)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散具有一定的抑制作用，但是常常會(huì)發(fā)生患者進(jìn)行多次化療后，化療對(duì)于腫瘤擴(kuò)散的抑制作用越來(lái)越小的情況。這是由于患者身體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞對(duì)于化療藥物產(chǎn)生了一種耐藥性。而耐藥性就是體內(nèi)病變體對(duì)化療藥物產(chǎn)生的一種耐受性，它會(huì)降低藥物的療效。醫(yī)學(xué)上會(huì)采用和腫瘤細(xì)胞具有相似特性的身體細(xì)胞進(jìn)行對(duì)抗腫瘤藥物敏感性的測(cè)試，以便篩選更具有療效的抗腫瘤藥物進(jìn)行治療，外周血淋巴細(xì)胞就是醫(yī)學(xué)上用來(lái)進(jìn)行敏感抗腫瘤藥物的篩選。

    外周血淋巴細(xì)胞對(duì)不同的抗腫瘤藥物具有不同的敏感性，但無(wú)法對(duì)所有的抗腫瘤藥物具有很強(qiáng)的敏感性，因此外周血淋巴細(xì)胞通常在很難獲取腫瘤細(xì)胞的情況下可以代替腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性進(jìn)行測(cè)試，間接來(lái)估計(jì)腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性。

    MTT是醫(yī)學(xué)上用來(lái)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況進(jìn)行檢測(cè)的一種方法，它主要是通過(guò)活細(xì)胞中的酶還原出晶體沉積在細(xì)胞中，并用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀來(lái)檢測(cè)光吸收值。晶體的數(shù)量能夠間接反映活細(xì)胞的數(shù)量。它具有方便高效、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的優(yōu)點(diǎn)，因此在醫(yī)學(xué)上廣泛使用。

    綜上所述，外周血淋巴細(xì)胞對(duì)于篩選敏感抗腫瘤藥物雖然不完全有效，但具有一定的參考價(jià)值。目前的醫(yī)學(xué)還未發(fā)現(xiàn)可以完全替代腫瘤細(xì)胞進(jìn)行對(duì)抗腫瘤藥物進(jìn)行敏感性檢測(cè)的人體細(xì)胞，因此外周血淋巴細(xì)胞對(duì)于醫(yī)學(xué)上篩選敏感抗腫瘤藥物臨床應(yīng)用具有很大的作用和意義。

【參考文獻(xiàn)】

[1]朱仲麗. 人外周血淋巴細(xì)胞亞群抗腫瘤效應(yīng)的研究[D].泰山醫(yī)學(xué)院,2012. 

[2]劉晶,魏文青,張艷,楊夢(mèng)迪,趙滿倉(cāng). 腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞和腫瘤組織對(duì)化療藥物敏感性的比較[J]. 中國(guó)誤診學(xué)雜志,2011（02）:258-260.